В РАБОЧЕЙ ЗОНЕ 4, ПОДЗОНЕ 2 ПЦР-ЛАБОРАТОРИИ ОСУЩЕСТВЛЯЮТ
1) учет результатов продуктов амплификации нуклеиновых кислот методом секвенирования и (или) на ДНК-чипах (+)
2) учет результатов продуктов амплификации нуклеиновых кислот методом электрофореза и (или) гибридизационно-ферментным методом
3) амплификация нуклеиновых кислот и учет результатов амплификации при использовании гибридизационно-флуоресцентного метода
4) автоклавирование
Верно выбран пункт 1: учет результатов амплификации методом секвенирования и/или на ДНК-чипах относится к пост-ПЦР аналитике и выполняется в рабочей зоне 4, подзоне 2 . Здесь обрабатывают высококонцентрированные ампликон-материалы в закрытом цикле анализаторов (секвенаторы, сканеры микрочипов), чтобы исключить обратное занесение ампликонов в чистые зоны. Пункты 2 и 3 описывают другие этапы: электрофорез и гибридизационно-ферментные методы обычно ведут в иной подзоне зоны 4 (чаще 1 ), а гибридизационно-флуоресцентный учет (real-time ПЦР) происходит в зоне 3 прямо во время амплификации в закрытых пробирках/планшетах. Автоклавирование — функция стерилизационной/моечной, а не зоны 4-2.
| Зона / подзона | Основное назначение | Разрешённые операции | Запрещённые операции | Типичные риски | Ключевой контроль качества |
|---|---|---|---|---|---|
| Зона 1 (реагенты) | Подготовка реакционных смесей | Разведение праймеров, приготовление мастер-микса | Работа с образцами ДНК/РНК и ампликонами | Контаминация реагентов ампликонами | УФ-облучение, отрицательные контроли реагентов |
| Зона 2 (материал) | Выделение НК из клин. образцов | Лизис, экстракция, дозирование экстрактов | Открытые ампликоны, электрофорез | Перекрёстная контаминация между пробами | Внутренние контроли выделения, однонаправленный поток |
| Зона 3 (амплификация) | Проведение ПЦР | Постановка реакции, real-time детекция в закрытых системах | Открытие ампликонов после амплификации | Аэрозоль ампликонов при вскрытии проб | Положит./отрицат. контроли, калибровка термоциклеров |
| Зона 4-1 (пост-ПЦР, визуал.) | Финальный учёт открытых ампликонов | Гели-электрофорез, гибридизационно-ферментные методики | Подготовка мастер-микса, работа с исходными образцами | Распространение ампликонов | Отдельные вытяжные боксы, утилизация расходников |
| Зона 4-2 (пост-ПЦР, аналитика) | Высокопроизводительная интерпретация | Учет результатов методом секвенирования, ДНК-чипы | Любые чистые операции до амплификации | Занос ампликонов в чистые зоны | Физическое разделение потоков, журналы трассировки |
| Стерилизационная / моечная | Обеззараживание | Автоклавирование, утилизация отходов класса Б/В | Любой аналитический учёт результатов ПЦР | Недостаточная стерилизация инструментов | Валидация автоклава (биоиндикаторы), журналы циклов |
| Общие требования | Однонаправленный поток | Раздельная спецодежда по зонам, цветовое кодирование | Возврат персонала/материалов назад по потоку | Человеческий фактор, перенос аэрозолей | Регулярные аудиты, контроль пустых проб (NTC) |