КОЛИЧЕСТВО РЕАКЦИЙ В ОДНОЙ ПРОБИРКЕ ПРИ РАЗРАБОТКЕ НАБОРОВ ДЛЯ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ ЛИМИТИРУЕТСЯ
1) концентрацией фермента
2) количеством лунок в приборе
3) количеством каналов детекции прибора (+)
4) объёмом реакционной смеси
Лимитирующим фактором при разработке наборов для ПЦР в реальном времени является количество каналов детекции прибора. Каждый канал позволяет регистрировать флуоресцентный сигнал от определённого флуорофора, ассоциированного с конкретной мишенью. Таким образом, если прибор поддерживает, например, только три канала, то одновременно можно анализировать максимум три разные мишени в одной пробирке, независимо от других условий.Это ограничение не связано напрямую с концентрацией фермента, количеством лунок или объёмом смеси — все эти параметры важны, но не определяют число параллельных реакций внутри одной пробирки. Основной ограничитель — это технические возможности прибора по различению сигналов от разных флуоресцентных меток.
| Фактор | Влияние на ПЦР | Может лимитировать количество реакций в одной пробирке? |
|---|---|---|
| Концентрация фермента | Влияет на эффективность амплификации | Нет |
| Количество лунок в приборе | Определяет количество образцов за один прогон | Нет |
| Количество каналов детекции | Ограничивает число мишеней в одной пробирке | Да |
| Объём реакционной смеси | Влияет на чувствительность и стабильность реакции | Нет |
Количество каналов детекции — ключевой параметр при разработке мультиплексных ПЦР-систем, так как именно он ограничивает число одновременно определяемых мишеней в одном анализе.