ДОПОЛНИТЕЛЬНЫМИ КОМПОНЕНТАМИ РЕАКЦИОННОЙ СМЕСИ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ПЦР ЯВЛЯЮТСЯ
1) пирофосфаты
2) внутренние контроли, ДНК-зонды (+)
3) ДНК-дуплексы
4) праймер-димеры
Для успешного проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) помимо основных компонентов — таких как ДНК-матрица, праймеры, дезоксинуклеотиды и ДНК-полимераза — в реакционную смесь могут добавляться дополнительные компоненты. Среди них важную роль играют **внутренние контроли и ДНК-зонды**. Внутренние контроли позволяют удостовериться в корректности реакции, а зонды, меченные флуоресцентными метками, используются, например, в Real-Time ПЦР для детекции специфичных амплификатов в режиме реального времени.Дополнительные компоненты не только повышают точность анализа, но и позволяют избежать ложноположительных и ложноотрицательных результатов, что особенно критично при диагностике инфекционных заболеваний, выявлении мутаций и других задачах молекулярной медицины.
| Компонент | Назначение | Пример использования |
|---|---|---|
| ДНК-полимераза | Катализ амплификации ДНК | Taq-полимераза |
| Дезоксинуклеотиды (dNTPs) | Строительный материал для новой цепи | dATP, dTTP, dCTP, dGTP |
| Праймеры | Инициация синтеза цепи | Олигонуклеотиды 18–25 нуклеотидов |
| Буфер | Обеспечение оптимальных условий реакции | MgCl2, KCl |
| ДНК-зонды | Обнаружение амплифицированной ДНК | TaqMan, Molecular Beacons |
| Внутренний контроль | Контроль достоверности ПЦР | Домашний ген (например, β-актин) |
| Минералы и стабилизаторы | Стабилизация активности фермента | Бетаин, DMSO |
