ДЛЯ УВЕЛИЧЕНИЯ СТЕПЕНИ ЭКСТРАКЦИИ ПРОИЗВОДНЫХ КАННАБИНОЛА РЕКОМЕНДУЮТ ИСПОЛЬЗОВАТЬ ДЛЯ МОЧИ
1) прямую экстракцию хлороформом
2) настаивание с этанолом
3) кислотный гидролиз
4) щелочной гидролиз (+)
Правильный выбор — щелочной гидролиз. В моче основные метаболиты каннабиноидов представлены полярными конъюгатами (преимущественно глюкуронидами 11-nor-9-карбокси-ТГК), которые плохо уходят в органическую фазу при прямой экстракции. Обработка щёлочью (NaOH/KOH) расщепляет ацил-глюкурониды до свободных кислот/фенолов, после последующего подкисления и экстракции неполярным растворителем резко возрастает выход целевых соединений. Кислотный гидролиз для этих метаболитов менее эффективен и может вызывать деградацию, а настаивание с этанолом и прямая экстракция хлороформом не решают проблему конъюгации.
| Метод | Механизм/цель | Когда применим | Влияние на выход производных каннабинола | Основные шаги (кратко) | Риски/заметки |
|---|---|---|---|---|---|
| Прямая экстракция хлороформом | Разделение по гидрофобности | Свободные (неконъюгированные) формы | Низкий: конъюгаты остаются в водной фазе | Подщелачивание/подкисление → добавление CHCl₃ → встряхивание → отбор органической фазы | Токсичный растворитель; эмульсии; потеря полярных метаболитов |
| Настаивание с этанолом | Десорбция/растворение | Матрицы с липофильными аналитами | Незначительный прирост; конъюгаты остаются связанными | Смешать с EtOH → перемешивание → центрифугирование/фильтрация | Разбавляет образец; коэкстракция матричных примесей |
| Кислотный гидролиз | Расщепление некоторых О-глюкуронидов/сульфатов | Метаболиты, устойчивые к кислоте | Часто неудовлетворительный; риск деградации ТГК-производных | HCl/H₂SO₄, нагрев → охлаждение → экстракция | Гидролиз ацил-глюкуронидов неполный; возможна изомеризация/потери |
| Щелочной гидролиз (рекомендуется) |
Расщепление ацил-глюкуронидов до свободных кислот | Основные метаболиты ТГК в моче | Высокий: конъюгаты переводятся в экстрагируемую форму | NaOH/KOH (pH>12), 60–70 °C, 10–30 мин → охлаждение → подкисление до pH≈3–5 → экстракция (гексан/этилацетат/хлороформ) | Контроль pH и времени; избежать пересушки и потерь при упаривании |
| Оптимизация pH перед экстракцией | Сдвиг ионизационного состояния (pKa) | Свободные кислоты/фенолы после гидролиза | Умеренный–высокий при правильном pH | Подкислить до pH 2–3 для извлечения кислот в неполярную фазу | Слишком высокий pH удержит анионы в воде; слишком низкий — эмульсии |
| Salting-out (NaCl/аммонийные соли) | Снижение растворимости органики в воде | Перед жидкостно-жидкостной экстракцией | Дополнительный прирост выхода | Добавить соль → тщательно перемешать → экстрагировать | Избыток соли → вязкость, трудность отделения фаз |
| Очистка SPE (C18/полимер) | Удаление матрицы, концентрирование | Перед ГХ-МС/ЖХ-МС | Косвенно повышает чувствительность | Кондционирование → загрузка → промывка → элюция | Выбор сорбента и элюента критичен для выхода |