ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ПНЕВМОЦИСТ НЕОБХОДИМО ИССЛЕДОВАТЬ МОКРОТУ, ОКРАШЕННУЮ ___________, В УЧАСТКАХ С _________ КОЛИЧЕСТВОМ КЛЕТОЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ
1) метиленовым синим; любым
2) гематоксилином; умеренным
3) азур-эозином; скудным (+)
4) по Цилю — Нильсену; большим
Правильным является окрашивание азур-эозином с целенаправленным поиском в участках мокроты со скудным количеством клеточных элементов. В пенистом, малоклеточном альвеолярном экссудате трофозоиты и цисты Pneumocystis лучше контрастируют (мелкие округлые структуры на розово-голубом фоне), тогда как густые зоны, переполненные нейтрофилами и макрофагами, маскируют возбудителя и снижают чувствительность мазка. Метиленовый синий и гематоксилин не дают специфической контрастности стенке цисты, а окраска по Цилю–Нильсену предназначена для кислотоустойчивых бактерий (например, микобактерий) и для пневмоцист малоинформативна.
Практический совет: сначала на малом увеличении пробегайте препарат и выбирайте светлые поля с пузырьками пены и минимальной клеточностью; уже затем переходите на большее увеличение для подсчёта и верификации форм паразита.
| Метод / окраска | Что становится заметным | Типичный материал | Плюсы | Минусы / примечания |
|---|---|---|---|---|
| Азур-эозин (Романовский-Гимза/Diff-Quik) | Трофозоиты и цисты на фоне пенистого экссудата | Мокрота (в т.ч. индуцированная), БАЛ | Быстро, дёшево, доступно; хорошо в малоклеточных участках | Чувствительность падает при выраженной клеточности |
| Метенаминовое серебрение (Грокотт–Гомори, GMS) | Чёткая стенка цисты (чашеобразные контуры) | БАЛ, биоптат, мокрота | Высокая контрастность и специфичность для цист | Трудоёмко; хуже видны трофозоиты |
| Толуидиновый синий O | Структуры цист в синем/фиолетовом спектре | БАЛ, мокрота | Быстрый скрининг | Ниже специфичность, возможны артефакты |
| Иммунофлуоресценция (IFA, моноклональные антитела) | Свечение цист/организмов по антигенам Pneumocystis | БАЛ > мокрота | Очень высокая чувствительность и специфичность | Требует флуоресцентного микроскопа и реагентов |
| ПЦР (qPCR) | ДНК Pneumocystis (количественно) | БАЛ, мокрота, НПАСП | Наиболее чувствительный метод; дифференциация колонизации/болезни по нагрузке | Нужна лаборатория; риск выявления бессимптомной колонизации |
| Гематоксилин-эозин (H&E) | Интерстициальное воспаление, пенистый материал в альвеолах | Биоптат лёгкого | Оценивает общий морфологический контекст | Неспецифично для возбудителя; для верификации нужен доп. окрас |
| Метиленовый синий | Общая окраска слизи/клеток | Мокрота | Доступно | Низкая информативность для Pneumocystis; нет специфических признаков |
| Циль–Нильсен (кислотоустойчивые) | Кислотоустойчивые бактерии (микобактерии) | Мокрота | Полезно для ТБ | Не подходит для Pneumocystis; цисты не кислотоустойчивы |
| Выбор поля зрения | Светлые зоны с пеной и минимумом клеток | Любой цитопрепарат мокроты/БАЛ | Повышает шанс обнаружения организмов | Требует целенаправленного поиска на малом увеличении |