ДОПОЛНИТЕЛЬНЫМ ЭТАПОМ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК-СОДЕРЖАЩИХ ВИРУСОВ МЕТОДОМ ПЦР ПО СРАВНЕНИЮ С ВЫЯВЛЕНИЕМ ДНК-СОДЕРЖАЩИХ ВИРУСОВ ЯВЛЯЕТСЯ
1) выделение вируса на микроцентрифужных колонках
2) амплификация в реальном времени
3) инкубация биологической пробы в лизирующем буфере
4) реакция обратной транскрипции (+)
Для выявления РНК-содержащих вирусов методом ПЦР требуется дополнительный этап – реакция обратной транскрипции. Это связано с тем, что стандартная полимеразная цепная реакция работает с ДНК-матрицей. Поэтому перед амплификацией необходимо преобразовать вирусную РНК в комплементарную ДНК (кДНК) с помощью фермента обратной транскриптазы. Этот этап предшествует основной ПЦР и делает возможным дальнейшее выявление вируса.Обратная транскрипция — ключевое различие между диагностикой РНК- и ДНК-вирусов при использовании ПЦР. Остальные варианты в вопросе являются общими этапами пробоподготовки или стандартными для ПЦР, но не уникальны для РНК-анализов.
| Этап | ДНК-вирусы | РНК-вирусы |
|---|---|---|
| Сбор биоматериала | Да | Да |
| Лизис клеток и выделение нуклеиновых кислот | Да | Да |
| Реакция обратной транскрипции | Нет | Да |
| Амплификация ДНК | Да | Да (после кДНК) |
| Реальное время (qPCR) | Опционально | Опционально |
| Интерпретация результатов | Да | Да |
