ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ ИСПОЛЬЗУЮТ
1) тест торможения миграции
2) тест хемотаксиса
3) фагоцитоз частиц латекса
4) BURST-тест (+)
Для оценки именно бактерицидной функции нейтрофилов важен их кислородзависимый взрыв — активация NADPH-оксидазы с быстрым образованием активных форм кислорода (ROS), которые убивают микробы внутри фаголизосомы. BURST-тест (варианты: NBT или DHR-флоуцитометрия) как раз и фиксирует наличие/мощность этого респираторного взрыва, поэтому он достоверно отражает бактерицидную активность фагоцитов и позволяет выявлять её дефекты, например при хронической гранулематозной болезни.
Остальные методы оценивают другие этапы врождённого иммунного ответа: тест торможения миграции связан с медиаторами воспаления, хемотаксис — со способностью клеток двигаться к хемоаттрактантам, а фагоцитоз латекса — с поглощением частиц (ингестией), но не с их внутриклеточным уничтожением. Поэтому именно BURST-тест является правильным выбором для определения бактерицидной активности.
| Метод | Что измеряет | Этап врождённого ответа | Как интерпретировать | Клиническое применение | Ограничения |
|---|---|---|---|---|---|
| BURST-тест (NBT/DHR) | Респираторный взрыв (образование ROS) | Бактерицидность внутри фаголизосомы | Нормально: выраженный сигнал/редукция красителя; Низко/нет — дефект杀 | Диагностика дефектов NADPH-оксидазы (ХГБ), мониторинг функции нейтрофилов | Требует стандартизации стимуляции; на результат влияет приём антиоксидантов/стероидов |
| Тест хемотаксиса | Движение нейтрофилов к градиенту хемоаттрактанта | Миграция к очагу воспаления | Сниженный индекс миграции — нарушение направленного движения | Оценка дефектов рецепторов/сигналинга миграции | Не отражает захват и убийство микробов |
| Тест торможения миграции | Влияние цитокинов/факторов на подвижность лейкоцитов | Регуляция воспаления | Торможение/отсутствие — изменение профиля медиаторов | Исследования клеточно-опосредованного иммунитета | Неспецифичен для бактерицидности |
| Фагоцитоз частиц латекса | Поглощение инертных частиц (ингестия) | Адгезия/опсонизация и захват | Высокий процент поглощения — сохранённая ингестия | Скрининг способности к захвату; оценка влияния опсонинов | Не оценивает убийство микроорганизмов |
| Классический NBT | Редукция нитросинего тетразолия до формазана в ходе ROS-взрыва | Кислородзависимая бактерицидность | Положительный — тёмные гранулы; отрицательный — их нет | Исторический и доступный аналог BURST-теста | Полуколичественен, субъективность подсчёта |
| DHR-флоуцитометрия | Окисление дигидродихлорфлуоресцеина с измерением флуоресценции | Кислородзависимая бактерицидность | Сдвиг флуоресценции вправо при стимуляции — норма; отсутствует — дефект | Точный количественный метод, подходит для скрининга и мониторинга | Требует флоуцитометра и правильной стимуляции |